瑞克纤孔菌发酵条件优化及菌丝化学成分定性分析

研究了瑞克纤孔菌液体发酵适宜的碳源、氮源、温度和pH值,并定性分析了菌丝体的主要化学成分.结果表明,玉米淀粉、甘露醇和葡萄糖为适宜碳源,以玉米淀粉为最适;硝酸钠等无机氮源不适宜该真菌生长,适宜氮源为蛋白胨和酵母粉,以蛋白胨为最适;菌丝生长的适宜pH=6.0～6.5,适宜温度为25～30℃.瑞克纤孔菌菌丝体含有氨基酸、多肽、蛋白质、有机酸、还原糖、多糖和甙、皂甙、甾体和三萜类化合物、内酯、香豆素和挥发油,不含有生物碱、酚类化合物、鞣质、黄酮类化合物、强心甙和蒽醌类物质.     

桦褐孔菌纯化多糖体外降血糖活性研究

采用水提醇沉法得到桦褐孔菌发酵粗多糖,将粗多糖过DEAE-52纤维素柱分离纯化得到两种多糖(EIOP1、EIOP2),本文以α-葡萄糖苷酶抑制活性、正常HepG2细胞及胰岛素抵抗HepG2细胞的单位细胞葡萄糖消耗量为主要指标,探究桦褐孔菌两种纯化多糖不同浓度(10、20、40、80、160和320 μg/mL)的降血糖活性,其中α-葡萄糖苷酶抑制活性以阿卡波糖作为阳性对照,葡萄糖消耗实验以二甲双胍作为阳性对照。结果表明,EIOP1、EIOP2的α-葡萄糖苷酶抑制活性均高于阳性对照组阿卡波糖与粗多糖,IC₅₀值分别为39.18、29.87 μg/mL。EIOP1在浓度为80 μg/mL时,对HepG2细胞的葡萄糖消耗量极显著高于对照组,促进效果最好,比对照组提高了30.62%(P<0.01);EIOP2在浓度在40 μg/mL时,葡萄糖消耗量极显著高于对照组,比对照提高了75.99%(P<0.01);对胰岛素抵抗HepG2细胞的葡萄糖消耗实验发现EIOP1在浓度为40 μg/mL时,促进效果最好,比胰岛素抵抗组提高了30.00%,EIOP2在浓度为80 μg/mL时,促进效果最好,比胰岛素抵抗组提高了90.49%,高于Met组(P<0.01)。因此,桦褐孔菌纯化多糖对正常HepG2细胞和胰岛素抵抗HepG2细胞的葡萄糖消耗均具有促进作用,对α-葡萄糖苷酶的抑制活性显著高于粗多糖。     

Renal Protective Effects of Low Molecular Weight of Inonotus obliquus Polysaccharide (LIOP) on HFD/STZ-Induced Nephropathy in Mice

Diabetic nephropathy (DN) is the leading cause of end-stage renal disease in diabetes mellitus. Oxidative stress, insulin resistance and pro-inflammatory cytokines have been shown to play an important role in pathogeneses of renal damage on type 2 diabetes mellitus (DM). Inonotus obliquus (IO) is a white rot fungus that belongs to the family Hymenochaetaceae; it has been used as an edible mushroom and exhibits many biological activities including anti-tumor, anti-oxidant, anti-inflammatory and anti-hyperglycemic properties. Especially the water-soluble Inonotus obliquus polysaccharides (IOPs) have been previously reported to significantly inhibit LPS-induced inflammatory cytokines in mice and protect from streptozotocin (STZ)-induced diabetic rats. In order to identify the nephroprotective effects of low molecular weight of IOP fraction (LIOP), from the fruiting bodies of Inonotus obliquus, high-fat diet (HFD) plus STZ-induced type 2-like diabetic nephropathy C57BL/6 mice were investigated in this study. Our data showed that eight weeks of administration of 10–100 kDa, LIOP (300 mg/kg) had progressively increased their sensitivity to glucose (less insulin tolerance), reduced triglyceride levels, elevated the HDL/LDL ratio and decreased urinary albumin/creatinine ratio(ACR) compared to the control group. By pathological and immunohistochemical examinations, it was indicated that LIOP can restore the integrity of the glomerular capsules and increase the numbers of glomerular mesangial cells, associated with decreased expression of TGF-β on renal cortex in mice. Consistently, three days of LIOP (100 μg/mL) incubation also provided protection against STZ + AGEs-induced glucotoxicity in renal tubular cells (LLC-PK1), while the levels of NF-κB and TGF-β expression significantly decreased in a dose-dependent manner. Our findings demonstrate that LIOP treatment could ameliorate glucolipotoxicity-induced renal fibrosis, possibly partly via the inhibition of NF-κB/TGF-β1 signaling pathway in diabetic nephropathy mice.     

桦褐孔菌富锗培养及其总黄酮抗氧化活性

以菌落直径为指标考察桦褐孔菌富锗培养的适宜加锗量,采用L9(34)正交优选的提取条件微波提取富锗培养后的桦褐孔菌总黄酮(简称Ge-TFIO),并运用活性氧(ROS)试剂盒、DPPH·法、H2O2诱导小鼠氧化溶血抑制实验评价Ge-TFIO的抗氧化能力。结果表明:桦褐孔菌富锗培养的适宜加锗量为40mg/L;富锗培养的桦褐孔菌总黄酮微波提取优化工艺条件为乙醇浓度80%、料液比1:40、处理时间180s、微波功率352W,此条件下,Ge-TFIO提取率为4.59%;2mg/mLGe-TFIO的抗活性氧单位为25.85U/mL,DPPH·自由基清除率为91.39%,H2O2诱导红细胞氧化溶血抑制率约为29.13%,可见,富锗培养后的桦褐孔菌总黄酮含量较高,具有较强的抗氧化活性。     

辐照处理对桦褐孔菌多糖抗疲劳作用的影响

目的:研究经过辐照处理的桦褐孔菌多糖对小鼠的抗疲劳作用.方法:用60Co-γ射线进行辐照,得到5、10、20、30 kGy辐照剂量和未辐照的桦褐孔菌菌粉制得多糖.分为对照组、辐照高中低剂量组和未辐照高剂量组,对雄性昆明种小鼠进行四周连续灌胃,测定小鼠爬杆、力竭游泳时间,肝糖原(LG)、肌糖原(MG)、全血乳酸(BLA)...     

桦褐孔菌子实体与菌丝体三萜化合物提取及活性比较研究

为探索桦褐孔菌菌丝体与子实体在药用价值上是否存在差别,采用有机溶剂冷浸、超声回流法提取桦褐孔菌菌丝体及子实体的三萜化合物,通过薄层层析和红外光谱分析,确定两种来源的三萜化合物是相同或近似的同系物。四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)和杯碟法测定两种来源三萜化合物对癌细胞和细菌的抑制作用,菌丝体三萜化合物对人胃癌细胞株MGC-803的最高抑制率可达到38.27%。结果证实人工培养的桦褐孔菌菌丝体同样具有子实体的药用价值,为人工培养桦褐孔菌菌丝体提供了依据。     

响应面法优化富硒粗毛纤孔菌菌丝生长培养基成分

本研究考察了粗毛纤孔菌对无机硒的耐受度,并通过响应面法对富硒粗毛纤孔菌菌丝生长培养基成分进行了优化。以粗毛纤孔菌菌丝生长速度为指标,通过单因素实验及Box-Behnken响应面优化,确定该菌菌丝富硒培养基的最佳组成成分,并通过电感耦合等离子体质谱法(ICP-MS)对该菌菌丝硒富集量进行检测。结果表明,粗毛纤孔菌菌丝的生长情况受外源硒影响较大,当硒浓度≥37.25 mg/L时,该菌菌丝生长开始受到显著的抑制(P<0.05),其对硒的最大耐受浓度约为298~596 mg/L;经响应面法优化得到富硒粗毛纤孔菌菌丝生长最优培养基成分为:麸皮56.8 g/L、葡萄糖49 g/L、Se 22.4 mg/L、MgSO₄ 0.75 g/L、KH₂PO₄ 1 g/L、V_B1 1 mg/L、琼脂15 g/L,在此条件下,富硒粗毛纤孔菌实际菌丝生长速度达到8.41 mm/d,与未优化对照组相比,菌丝生长速度提高了0.965倍,且硒富集量达到31.584 μg/g。本研究获得了富硒粗毛纤孔菌菌丝生长培养基最优配方,为富硒粗毛纤孔菌菌丝体的大量制备、富硒粗毛纤孔菌子实体的栽培及其它后续研究提供了理论依据。     

醇水交换法提取桦褐孔菌生物活性物质的工艺研究

目的:利用超声热学及空化技术,研究醇-水交换提取桦褐孔菌中的三萜类和多糖生物活性物质的最佳提取工艺。方法:桦褐孔菌粉碎,过30目筛,超声辅助醇-水交换提取其生物活性物质。结果:醇提三萜类物质最佳工艺为:温度30℃,时间50min,提取3次,液料比25∶1,得率为1.30%;水提多糖最佳工艺为:温度50℃,时间40min,提取3次,液料比35∶1,得率为6.96%。结论:超声辅助醇-水交换提取桦褐孔菌中的生物活性物质的最佳提取工艺稳定、合理可行,能有效提高桦褐孔菌的综合利用。      

诱导发酵桦褐孔菌三萜类化合物合成及其抗氧化功能的研究

本文通过在桦褐孔菌液体发酵过程中加入外源诱导剂,探究其对桦褐孔菌菌丝体中三萜类化合物含量以及菌丝体醇提物抗氧化性的影响。结果表明:茉莉酸甲酯(MeJA)、水杨酸(Salicylic acid,SA)、亚油酸、桦树皮水提物、铁离子(Fe²⁺)5种诱导剂均能增加菌丝体中总三萜类化合物含量和提高其醇提物抗氧化能力。其中MeJA效果最佳,在第6 d加入50 μmol/L茉莉酸甲酯可得到菌丝体的量为(10.05±0.01) g/L,菌丝体中三萜含量(107.72±1.07) mg/g,三萜总量为1082.19 mg/L,与不加入诱导剂的对照组相比三萜总量增加了119.96%。抗氧化能力试验中,MeJA诱导的桦褐孔菌醇提物总还原力1.003,DPPH自由基、羟基自由基、超氧阴离子自由基的IC₅₀分别为0.091、1.657、0.024 mg/mL,与对照组相比总还原能力与各自由基清除率分别提高了46.67%、53.23%、32.17%和30.30%。本研究为诱导剂在提高桦褐孔菌三萜类化合物产量上以及开发新的抗氧化剂提供科学依据。     

大孔树脂纯化桦褐孔菌多酚及其成分分析

采用大孔吸附树脂对桦褐孔菌多酚进行纯化,并采用高效液相色谱-电喷雾-质谱（high performance liquidchromatography-electrosprary ionization-mass spectrometry,HPLC-ESI-MS）技术对桦褐孔菌多酚纯化物进行分离鉴定分析。实验结果表明,D101树脂不仅静态吸附量、吸附率最大,且解吸性能优良,适合分离纯化桦褐孔菌多酚。最佳纯化工艺条件为上样质量浓度1.0 mg/mL、上样流速1.0 mL/min、洗脱液乙醇溶液体积分数70%、洗脱流速1.0 mL/min,在此条件下,其纯度由16.52%提高到了49.77%;根据HPLC-ESI-MS检测分析结果推测桦褐孔菌多酚中含有9 种物质,分别为无色花色素、花旗松素-3-O-α-L-吡喃鼠李糖苷、仙茅苷、像黄素-3-O-己糖苷、7-木糖苷儿茶酚、雪胆素乙、桔皮素、儿茶素、芦丁。